Klorofil ialah pigmen hijau yang terdapat pada tumbuhan yang lebih tinggi dan semua organisma fotosintetik yang lain. Klorofil A dan klorofil B adalah larut dalam etanol, eter dan aseton dan pelarut lain, tidak larut dalam air dan eter petroleum, oleh itu, boleh menggunakan pelarut polar seperti aseton, metanol, etanol, etil asetat dan sebagainya untuk mengekstrak klorofil.
Proses pengekstrakan klorofil:
Pengekstrakan klorofil disediakan di dalam bilik separa gelap pada suhu 25 darjah C. Langkah-langkah pengekstrakan adalah seperti berikut:
(1) Ambil 1000 gram daun hijau segar dan hancurkan dalam Wechsler.
(2) Masukkan 1000 gram daun hijau yang dihancurkan ke dalam aseton dengan sedikit kalsium karbonat (suhu 20 darjah ) untuk diekstrak, sehingga serpihan daun tidak berwarna selepas ditapis dan dibersihkan.
(3) Masukkan ekstrak aseton yang ditapis ke dalam corong yang mengandungi 1 liter petroleum eter dan 100mL aseton, dan kemudian putar perlahan-lahan, sambil menambah air suling sehingga berstrata. Kebanyakan aseton dan kekotoran larut air dalam lapisan air dibuang, hanya meninggalkan larutan eter petroleum.
(4) Selepas larutan eter petroleum ditulenkan semula dengan air suling, ia dibersihkan lebih daripada 5 kali dengan 200ml80 peratus larutan metanol yang mengandungi eter petroleum dan 0.01g asid oksalik, dan akhirnya suspensi kuning-hijau diperolehi .
(5) Keringkan ampaian dengan natrium sulfat kontang, dan susupkannya ke dalam lajur yang diperbuat daripada serbuk sukrosa setebal 3cm. Kemudian bersihkan pigmen termendak untuk membuang karotenoid dan menjadikannya hanya mengandungi klorofil semula jadi.
(6) Lajur sukrosa yang mengandungi klorofil semula jadi dibahagikan kepada dua lapisan, lapisan hijau mempunyai 4-10mm lapisan klorofil B, lapisan biru yang lain ialah 2-6mm lapisan klorofil A.
(7) Bahagian yang terletak di tengah-tengah lapisan biru (kira-kira separuh daripada lapisan biru) dimasukkan ke dalam eter, ampaian ditapis dan diekstrak, dibersihkan dengan air suling, dikeringkan dengan natrium sulfat, dan ditapis dengan peralatan untuk mendapatkan klorofil. A.
(8) Keluarkan bahagian tengah lapisan hijau dalam (6), dan masukkan dengan cepat ke dalam eter untuk penapisan dan pencucian untuk membuat larutan klorofil B eter.
Bagaimana untuk memisahkan semasa pengekstrakan?
Kromatografi adalah kaedah penting untuk pengasingan, penulenan dan pengenalpastian sebatian organik, terutamanya dalam analisis mikro digunakan secara meluas. Pigmen dalam buah-buahan dan sayur-sayuran terutamanya termasuk karotena larut lemak, lutein, klorofil dan antosianin larut air. Dalam eksperimen pengekstrakan, kita boleh menggunakan prinsip penapisan anthocyanin larut air yang serupa, yang seterusnya boleh menggunakan kromatografi lapisan nipis, kromatografi lajur, kromatografi cecair berprestasi tinggi (HPLC) kepada pengasingan beta-karotena, lutein. dan klorofil, lemah disebabkan oleh kekutuban ketiga-tiga jenis pigmen seterusnya, boleh dengan sewajarnya memilih pelarut organik tunggal atau nisbah berbeza pelarut campuran sebagai agen pengembangan dan agen elusi, Keadaan pemisahan yang optimum telah ditentukan.
